三、细胞培养基的使用方法 - 宜兴市赛尔生物科技有限公司
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    三、细胞beplay sports官网的使用方法

    三、细胞beplay sports官网的使用方法

      细胞beplay sports官网的种类繁多,细胞培养方式也较多,如何正确地使用beplay sports官网及最大程度地保持beplay sports官网的营养以维持细胞的生长,对每个培养者都很重要。beplay sports官网的使用依不同的beplay sports官网种类、培养方式、细胞种类的不同而存在差异。

    3.1 细胞培养液的成构

    细胞培养液指细胞生长的液体环境,一般指完全培养液,添加了血清、水解乳蛋白、各种添加剂等可以直接使用的培养液。

    3.1.1 细胞beplay sports官网&血清模式

    血清对于在传统beplay sports官网配方中生长和增殖的大多数细胞系来说是需要的,因为大多数单独的beplay sports官网并不能提供细胞生长所需要的全部营养,如MEMbeplay sports官网,较为常用的量为5%-10%的比例,而特殊的低血清beplay sports官网血清量可降至3%左右,细胞的形态和功能不受影响。

    3.1.2 细胞beplay sports官网&乳欧液模式

    化学合成beplay sports官网现虽已大规模使用,但在某些培养领域水解乳蛋白仍在使用,以补充培养液中缺乏的氨基酸、小肽物质。较为常用的方式是用汉氏(Hanks′BSS)或欧式(Earle′s BSS)平衡液溶解水解乳蛋白(一般为5‰浓度),即成乳汉(欧)液,再与化学合成beplay sports官网(一般为MEM)按比例混合使用(如1:1)。

    3.1.3 细胞beplay sports官网&各类添加剂(生长因子等)模式

    成分复杂的beplay sports官网还含有许多化合物,包括蛋白质、多肽、核苷、柠檬酸循环的中间产物、丙酮酸及脂类等。已发现当beplay sports官网中的血清浓度减少时,这些成分都是必需的。既使在使用血清的情况下,这些成分也可帮助细胞的克隆化培养及维持某些特殊细胞系的生长。激素和生长因子在大多数常规beplay sports官网的配方中都没有注明,但在无血清beplay sports官网中通常要加入它们,用其来代替血清中的激素能增加多种不同类型细胞的贴瓶率;生长因子包括FGF家族、EGF、PDGF、IGF-1和IGF-2及白介素等,生长因子和细胞因子有着广泛的特异性,一般与激素或其它物质起相互协同或加成作用。另一种常见的添加物就是血清替代物,目前已有许多可完全或部分替代传统培养液中血清成分的商业产品,其稳定性较好,但批次间仍有差别,产品的成分也不很确定。

    3.2 细胞beplay sports官网的选择

    3.2.1根据细胞或病毒特性、培养方式选择合适beplay sports官网

    不同的细胞株和培养条件都有着不同的营养需求,这就需要配一个最优化的细胞beplay sports官网,才能够提高生物制品的产率。

    3.2.2 选择高品质的细胞培基养

    细胞beplay sports官网产品应该符合国家化工行业标准;细胞beplay sports官网的生产更应该实施GMP 管理。我国对药品生产实施GMP 管理,但用于生物制品(药品)生产的细胞beplay sports官网却未纳入其中。细胞beplay sports官网作为生物制药的重要原料,从人员、设施与设备、生产过程、质量控制等方面须严格按GMP 要求进行生产,这是保障细胞beplay sports官网合格产品生产的必要条件。

    3.2.3 从经济性角度选择合适的细胞培基养

    不论是疫苗生产,还是抗体生产,采用高品质、更符合生产实践的个性化细胞beplay sports官网,才能从根本上提高生物制品质量,降低生物制品的综合生产成本。

    (1) 提高了细胞密度和细胞活力;
    (2) 提高了单位体积培养液中病毒量或抗体表达量,提高了生产效率;降低了动物来源成分,简化纯化成本,提高了生物制品的安全性。

    3.3 细胞beplay sports官网配制

    3.3.1干粉beplay sports官网原倍液的配制

    1)配制过滤除菌的细胞beplay sports官网
    (1) 阅读beplay sports官网使用说明,确定需要添加何种添加剂(如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等)。
    (2) 根据所需将beplay sports官网全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)将袋内残留beplay sports官网洗下,并入容器。加注射用水至总体积的95%,轻微搅拌溶解。
    (3) 加入规定量的碳酸氢钠及所要添加的物质。
    (4) 轻微搅拌溶解,加注射用水至规定体积。
    (5) 用 1mol / L 氢氧化钠溶液或 1mol / L 盐酸溶液调pH至所需值。
    (6) 用 0.22μm滤膜正压过滤除菌。
    (7) 溶液应在2℃-8℃下避光保存。
    具体使用方法参照beplay sports官网包装袋上的说明书。

    2)配制可高压灭菌细胞beplay sports官网
    (1) 根据所需将beplay sports官网全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)将袋内残留beplay sports官网洗下,并入容器。加注射用水至总体积的95%,轻微搅拌溶解。
    (2) 在 121℃、15psi下灭菌15分钟。
    (3) 待溶液冷却至室温,加入无菌0.2mol / L L-谷氨酰胺溶液规定体积、无菌7.5%(w/v)碳酸氢钠溶液规定体积,加注射用水(20℃~30℃)至规定体积,混匀。
    (4) 如果必要,用1mol / L 氢氧化钠溶液或 1mol / L 盐酸溶液调pH至所需值。
    (5) 溶液应在2℃-8℃下避光保存。具体使用方法参照beplay sports官网包装袋上的说明书。

    3.3.2注意事项

    1) 细胞培养用水一般为三蒸水(经石英蒸馏器蒸馏)或超纯水,医药生产上一般为注射用水。
    2) 建议尽量选择与所用量相匹配的包装一次使用,因为包装一旦打开,组分可能会变质或因受潮而结团。
    3) 溶解干粉beplay sports官网时先加入终体积90%-95%的培养用水,添加剂加完后再补足。
    4) 如需添加的组分较多时,某一组分完全溶解后,再添加另一组分。
    5) 待beplay sports官网完全溶解后再加入碳酸氢钠,以免产生沉淀。
    6) 所有成分完全溶解后,beplay sports官网应立即过滤或高压除菌,以免产生沉淀或有微生物污染。
    7) 在过滤除菌时,一般情况下应调pH比所需值低0.1~0.2个单位,因过滤除菌后,pH值会升高约0.2。
    8) 在细胞培养过程中,建议不加或加少量的抗生素,如血清的浓度较低则所加抗生素的量也要相应降低一些。
    9) 建议用1N HCl或1N NaOH来调节beplay sports官网的pH,因为用碳酸氢钠来调对培养液的渗透压影响比较大。

    3.4 灭菌方法

    beplay sports官网的灭菌方法主要有两种,高压除菌及0.22μm微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比,高压灭菌的工作强度小,相对便宜,失败率低,但易造成营养成分的流失。而且很多细胞beplay sports官网由于营养成分丰富不能够采用高压方式进行灭菌。

    3.4.1 高压灭菌

    某些beplay sports官网(如MEM)可进行高压灭菌,例如宜兴赛尔的MEMbeplay sports官网中的MD605、MD609等。其中不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠,可在高压灭菌后加入。另外可高压的谷氨酸盐可代替L-谷氨酰胺。为保证高压灭菌的效果,灭菌设备的验证很关键,可高压灭菌的beplay sports官网在121℃、15psi,15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失,因此不需将灭菌时间延长。

    3.4.2 过滤灭菌

    大多数beplay sports官网采用0.1~0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌,并且已成为beplay sports官网除菌的发展方向,它可低限度地减少beplay sports官网的营养损失。

    3.4.3 细胞培养液的储存

    细胞培养液的储存条件一般为2-8℃、密闭、避光保存,但要注意如下几点:
    1) 过滤后的完全培养液,即添加了血清、谷氨酰胺、抗生素等的培养液要尽快使用,一般在2-3周内使用完。培养液中的L-谷氨酰胺是不稳定的,不同温度L-谷氨酰胺的降解见下图:
    2) 灭菌后的未加L-谷氨酰胺等添加剂的beplay sports官网溶液,一般可在4℃保存6~9个月,也可冷冻保存,用时解冻。
    3) 高压除菌后的beplay sports官网应置4℃保存,不能因为其可耐受高温而忽略储存温度。
    4) 添加某些生长因子、激素等添加物,可能会改变培养液的储存条件,比如温度、时间等方面的要求。

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